2×Pfu PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān)
本產(chǎn)品包含Pfu DNA聚合酶重要手段、dNTPs結構重塑、MgCl2信息化、反應(yīng)緩沖液可靠保障,濃度為2×效果較好。 保真度是Taq酶的54倍法治力量,用于高保真PCR反應(yīng)全技術方案、復(fù)雜模板如GC含量高(>60%), 有二級結(jié)構(gòu)等的擴(kuò)增和大規(guī)模的基因檢測共享。2×Pfu PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān)
2× PFU PCR Master Mix(含染料)
2×Pfu PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān)
目錄號:71111
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 71111-05 | 71111-0100 |
2× PFU PCR Master Mix | 5x 1ml | 100x 1ml |
保存條件
-20℃保存信息化,有效期 2 年。經(jīng)常使用生動,可置于 4 °C 保存新型儲能,有效期 3 個月。
產(chǎn)品簡介
本產(chǎn)品包含Pfu DNA聚合酶新品技、dNTPs範圍、MgCl2、反應(yīng)緩沖液紮實做,濃度為2×空間廣闊。 保真度是Taq酶的54倍,用于高保真PCR反應(yīng)提供深度撮合服務、復(fù)雜模板如GC含量高(>60%)服務品質, 有二級結(jié)構(gòu)等的擴(kuò)增和大規(guī)模的基因檢測。
PCR產(chǎn)物為平末端組成部分,純化后可直接用于Blunt載體克隆影響。
本產(chǎn)品含紅色示蹤染料,不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進(jìn)行電泳的過程中;也可經(jīng)過純化處理指導,以用于酶切、連接國際要求、測序等后續(xù)操作。
適用范圍:
高保真DNA擴(kuò)增:如表達(dá)基因的克隆鍛造、基因的定點突變競爭激烈、細(xì)胞內(nèi)基因點突變的分析(SNP)和末端補平。
基因檢測:適合大規(guī)母纳?;驒z測智慧與合力,半定量PCR實驗和微量DNA的檢測。
產(chǎn)品特點
具有快速簡便重要的角色、靈敏度高開放要求、特異性強向好態勢、穩(wěn)定性好等優(yōu)點,可最大限度的減少人為誤差服務機製。
2 × Pfu PCR Master Mix 使用說明:
一貢獻力量、配制 PCR 反應(yīng)體系:(于冰上配制)
Component | 20 μlReaction | 50 μl Reaction | FinalConcentration |
2× Pfu PCR Mix | 10 μl | 25 μ | 1 × |
Forward Primer (10 μM) | 0.4 μ | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer(10 μM) | 0.4 μ | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | asrequired | as required | |
ddH2O | up to 20 μl | up to 50 μ |
參考模板用量(50 μl 反應(yīng)體系):
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
質(zhì)粒:0.1-10 ng;細(xì)菌基因組:10-100 ng大幅拓展;人類基因組:50-150 ng發行速度;cDNA:1-5 μl 。
二與時俱進、建議 PCR 循環(huán)條件:
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initialdenaturation | 94℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 10 seconds |
25-35 cycles |
Annealing | 55℃ | 10 seconds | |
Extension | 72℃ | 0.5-1kb / min | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
注意:如果擴(kuò)增片段≤4 kb性能,建議延伸速度為 1kb / min;片段>4 kb綜合運用,建議 0.5kb / min供給。
注意事項:
a. Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性,所以Pfu酶擴(kuò)增時延伸速度比Taq酶低實事求是,應(yīng)根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的長度設(shè)置相應(yīng)的延伸時間進行探討,如果擴(kuò)增片段小于4 kb,建議Pfu酶的延伸速度為1kb/ min等多個領域;如果擴(kuò)增片段大于4 kb再獲,建議延伸速度為0.5kb / min。同時Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物應用擴展, 所以應(yīng)先加dNTP后體驗區,再加Pfu酶到反應(yīng)體系中,并立即進(jìn)行PCR反應(yīng)活動上。
b. 用Pfu酶擴(kuò)增時有望,引物的純度要求較高,引物長度大于18個堿基導向作用,Tm在55-80℃ 之間方案,引物濃度在0.1-0.5 μM之間,比Taq酶略高十大行動。
c. Pfu酶的熱穩(wěn)定性比Taq酶好左右,對于GC含量很高的模板,變性溫度可以提高到98℃強化意識,對Pfu酶的活性無影響長期間。
三、結(jié)果檢測:反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物現場,瓊脂糖凝膠電泳檢測高端化。
2×Pfu PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān)