Pfu DNA Polymerase（含超純dNTP）PCR相關(guān)
Pfu DNA Polymerase 是從克隆有DNA Polymerase 基因的大腸桿菌中分離純化的切實把製度， Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性更加完善，能糾正DNA擴(kuò)增過(guò)程中產(chǎn)生的堿基錯(cuò)配廣度和深度。Pfu酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐高溫DNA Polymerase中出錯(cuò)率zui低的溝通協調。Pfu DNA Polymerase（含超純dNTP）PCR相關(guān)
Pfu DNA Polymerase (含超純 dNTP)
Pfu DNA Polymerase（含超純dNTP）PCR相關(guān)
目錄號(hào)：:71013
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 71013-0500 | 71013-03000 |
Pfu DNA Polymerase（5U/µl） | 500 U | 3000 U |
10× Pfu Buffer+（with MgSO4） | 1 ml | 6×1ml |
SuperPure dNTP mix（10 mM） | 0.2 ml | 1.2 ml |
保存條件
-20℃保存自動化方案，有效期 2 年密度增加。
經(jīng)常使用有效性，可置于 4 °C 保存技術，有效期 3 個(gè)月效高化。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Pfu DNA Polymerase 是從克隆有DNA Polymerase 基因的大腸桿菌中分離純化的， Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性，能糾正DNA擴(kuò)增過(guò)程中產(chǎn)生的堿基錯(cuò)配產能提升。Pfu酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐高溫DNA Polymerase中出錯(cuò)率zui低的。其PCR產(chǎn)物為平端製造業，可直接用平端載體克隆記得牢。
活性單位:
1 單位（U）Pfu DNA Polymerase 活性定義為在 74℃、30 分鐘內(nèi)更優美，以活性化的大馬哈魚(yú)精子 DNA 作為模板引物各方面，將 10 nmol 脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。
質(zhì)量控制:
SDS-PAGE 檢測(cè)純度大于 99%成效與經驗，經(jīng)檢測(cè)無(wú)外源核酸酶活性適應性；PCR 方法 檢測(cè)無(wú)宿主殘余 DNA，能有效地?cái)U(kuò)增人基因組中的單拷貝基因稍有不慎；室溫存放一周重要作用，無(wú)明顯活性改變。
酶貯存緩沖液：
50mM Tris-HCl(pH 8.2)最為顯著，0.1mM EDTA完成的事情，1mM DTT，Stabilizers最深厚的底氣，50% glycerol協同控製。
10×Pfu Buffer (含Mg2+)：
200 mM Tris-HCl (pH8.8)，100 mM KCl品質，100 mM(NH4)2 SO4利用好，20 mM MgSO4，其他成分解決問題。
適用范圍：
用于DNA的高保真擴(kuò)增系列，如基因表達(dá)克隆、基因定點(diǎn)突變相互配合、細(xì)胞內(nèi)基因點(diǎn)突變分析（SNP）和平末端補(bǔ)平等慢體驗。
注意事項(xiàng)：
1. Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性，所以Pfu酶擴(kuò)增時(shí)延伸速度比Taq酶低智能化，應(yīng)根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的長(zhǎng)度設(shè)置相應(yīng)的延伸時(shí)間科技實力，如果擴(kuò)增片段小于4 kb，建議Pfu酶的延伸速度為1kb / min建設；如果擴(kuò)增片段大于4 kb在此基礎上，建議延伸速度為0.5kb / min。同時(shí)Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物前來體驗， 所以應(yīng)先加dNTP后自主研發，再加Pfu酶到反應(yīng)體系中確定性，并立即進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2. 用Pfu酶擴(kuò)增時(shí)損耗，引物的純度要求較高講故事，引物長(zhǎng)度大于18個(gè)堿基，Tm在55－80℃ 之間性能穩定，引物濃度在0.1-0.5 μM之間全面革新，比Taq酶略高。
3. Pfu酶的熱穩(wěn)定性比Taq酶好越來越重要，對(duì)于GC含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃發揮重要作用，對(duì)Pfu酶的活性無(wú)影響醒悟。
4. 高保真PFU對(duì)于dNTP純度要求很高，因此建議用本酶配套的超純dNTPmix高質量。
Pfu DNA Polymerase的使用說(shuō)明：
一技術先進、 配制 PCR 反應(yīng)體系：(于冰上配制)
Component | 20μl Reaction | 50μl Reaction | 終濃度 |
Template DNA | as required | as required | 10pg-0.5μg |
Forward Primer (10 μM) | 0.4 μl | 1 μ | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4 μ | 1 μl | 0.2 μM |
10×Buffer（withmgcl2） | 2 μ | 5 μ | |
Pfu DNA polymerase(5U/μl) | 0.2 μl | 0.5μ | |
ddH2O | up to 20 μl | up to 50 μ |
參考模板用量（50 μl 反應(yīng)體系）：
質(zhì)粒：0.1-10 ng；細(xì)菌基因組：10-100 ng延伸；人類基因組：50-150 ng認為；cDNA：1-5 μl from RT。
二新趨勢、 設(shè)置 PCR 循環(huán)條件：（請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整）
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initial denaturation | 94℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 30 seconds |
30-35 cycles |
Annealing | 50-60℃ | 30 seconds | |
Extension | 72℃ | 0.5-1kb / minute | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
三反應能力、結(jié)果檢測(cè)：反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)學習。
Pfu DNA Polymerase（含超純dNTP）PCR相關(guān)
