真菌基因組DNA提取試劑盒(非柱式) NobleRyder D0928
北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)真菌基因組DNA提取試劑盒(非柱式) NobleRyder D0928量大優(yōu)惠,咨詢 :
真菌基因組DNA提取試劑盒(非柱式) NobleRyder D0928
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真菌基因組DNA提取試劑盒
試劑盒組成 | 50T | 200T | 保存溫度 | ||
RNaseA(10mg/ml) | 500ul | 2ml | -20℃ | ||
蛋白酶K(10mg/ml) | 500ul | 2ml | -20℃ | ||
玻璃珠 | 5g | | | RT | |
裂解液 | 15ml | 60ml | RT | ||
結(jié)合液 | 25ml | 100ml | RT | ||
玻璃奶 | 1ml | 4ml | RT | ||
TE緩沖液 | 10ml | 30ml | RT |
原理簡(jiǎn)介
真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物。種屬很多基礎上,已報(bào)道的屬達(dá)1萬(wàn)以上,種超過(guò)10萬(wàn)個(gè)應用領域。真菌通常又分為三類(lèi)保供,即酵母菌等多個領域、霉菌和蕈菌(大型真菌)事關全面。對(duì)于酵母菌和霉菌發揮,可以用玻璃珠處理組織了,而對(duì)于大型真菌服務體系,可直接用液液氮研磨。經(jīng)過(guò)前期處理的菌液搶抓機遇,再經(jīng)過(guò)裂解液及蛋白酶處理后分析,玻璃奶吸附DNA,去掉其他雜質(zhì)全面闡釋,非常激烈,可得到高純度的基因組。提取純化后的DNA引人註目,可以直接用于 PCR/Real time-PCR設備製造,sequencing,Southern blot攻堅克難,mutant analysis管理,SNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)顯示。
注意事項(xiàng)
1.由于真菌種類(lèi)萬(wàn)千,對(duì)于一些特別難處理的真菌效率和安,可用液氮研磨設計能力,再用玻璃珠振蕩,蛋白酶K處理深入開展,一般都可以得到一定量的基因組DNA更為一致,如電泳檢測(cè)很弱,一般PCR都會(huì)有較好結(jié)果技術的開發。
2.如果DNA提取量很少研究與應用,可加長(zhǎng)玻璃珠處理時(shí)間,如果提取DNA片段很短更高效,成彌散條帶的發生,可減少玻璃珠處理時(shí)間。
操作步驟
1.樣品的處理:
1)對(duì)于酵母菌影響,取1-2ml培養(yǎng)好的菌液新的動力,離心收集,棄上清發展契機。加入300ul 裂解液廣泛關註,加入10ul RNase A,再加入100mg玻璃珠發力,在高速振蕩器上振蕩優勢領先,約5-10min。
2)霉素(孢子也可相同處理):取50-100mg菌絲共創美好,加300ul裂解液推動並實現,用玻璃研磨器適當(dāng)研磨分散菌絲,加入10ul RNase A覆蓋範圍,再加入100mg玻璃珠優化程度,在高速振蕩器上振蕩,約30min奮勇向前。
3)大型真菌(如蘑菇等):稱取50-100mg樣品不斷豐富,倒入適量的液氮,立即研磨重復(fù)3 次規劃,使樣品研成粉末(如無(wú)液氮擴大公共數據,可加300ul裂解液后用玻璃研磨器適當(dāng)研磨),加300ul裂解液帶動擴大,加入10ul RNase A核心技術體系,再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩持續發展,約5min必然趨勢。
2.加入10ul 10mg/ml的蛋白酶K綜合運用,充分混勻,
3.12000轉(zhuǎn)離心2min落到實處。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中服務水平。如有沉淀,可再次離心技術創新。
4.在上清中加入三倍體積無(wú)水乙醇處理方法,充分混勻。
5.12000rpm離心5分鐘持續向好,去上清習慣,核酸在沉淀中。
6.沉淀中加入500ul結(jié)合液進展情況,55℃水浴1-2分鐘的積極性,核酸沉淀可溶解。
6.玻璃奶搖勻至關重要。加入50ul搖勻的玻璃奶不久前,混勻,室溫放置2分鐘提升行動,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘能力建設,去上清;沉淀加入1ml 70%乙醇研究進展,振蕩混勻無障礙,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,去上清快速融入,70%乙醇重復(fù)洗一次善於監督,再用無(wú)水乙醇洗一次。去上清深入實施,再次離心2分鐘至關重要,用小吸頭吸去上清發展空間。
7.室溫放置10分鐘(如果玻璃奶加量效果,請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)放置時(shí)間,此步為去除殘余酒精足了準備,以免影響下游實(shí)驗(yàn))合作關系,加入50-100ul TE緩沖液混勻溶解,55℃水浴5分鐘深刻內涵。離心傳遞,取上清為所提基因組融合。
8.電泳或者其他方法檢測(cè),進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)相關性。
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)完成的事情,是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑穩定、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā)改造層面、銷(xiāo)售、服務(wù)為一體的生物科技公司優勢與挑戰,公司主要經(jīng)營(yíng)的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas(MBI), NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等經驗分享;產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑趨勢、分子克隆相關(guān)試劑有力扭轉、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器一站式服務。
真菌基因組DNA提取試劑盒(非柱式) NobleRyder D0928