全血基因組DNA提取試劑盒 NobleRyder D0923
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全血基因組DNA提取試劑盒 NobleRyder D0923
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全血基因組DNA提取試劑盒
試劑盒組成 | 50T | 200T | 保存溫度 |
RNaseA(10mg/ml) | 500ul | 2ml | -20℃ |
蛋白酶K(10mg/ml) | 500ul | 2ml | -20℃ |
紅細胞裂解液(10×) | 30ml | 120ml | RT |
裂解液 | 12.5ml | 50ml | RT |
結(jié)合液 | 25ml | 100ml | RT |
玻璃奶 | 2.5 | 10ml | RT |
TE緩沖液 | 10ml | 30ml | RT |
原理簡介
本試劑盒適用于各種動物抗凝全血樣本機構,用于從中提取基因組DNA推進高水平。*的裂解緩沖液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物質(zhì),并利用玻璃奶吸附DNA關鍵技術,進一步的去掉其他雜質(zhì)了解情況,提取出來,得到的DNA可用于PCR/Real time-PCR技術研究,sequencing重要的,Southern blot,mutant analysis姿勢,SNP 等下游應用實驗相互融合。
注意事項
1.裂解液低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在熱水中溫浴幾分鐘幫助重新溶解綠色化,恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用不同需求。
2.避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化保持穩定、pH值變化總之,各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。
3.RNaseA經(jīng)常使用可放2-8度保存支撐作用,蛋白酶K請放-20度保存研學體驗。
4.同一樣本,如果想大量提取最為突出,可以增加樣本量落實落細,并且每一步試劑加量,但使用次數(shù)會成倍減少高效化。
操作步驟
在合適的容器中製高點項目,用雙蒸水將紅細胞裂解液(10×)稀釋成1×。即10ml溶液中加入90ml雙蒸水混勻範圍和領域。
1.取不超過500ul抗凝血有所增加,加入三倍體積的稀釋過的紅細胞裂解液,混勻特征更加明顯。放置2分鐘長效機製,12000rpm離心1分鐘。去上清數字技術。再加入2倍體積的紅細胞裂解液奮戰不懈,用移液器輕輕吹打沉淀,充分混勻措施,離心大大縮短,棄上清,沉淀為白細胞緊密相關。如果血液為家擒類動物更默契了,因為紅細胞有核先進技術,所以可以省去此步,但加入的樣品量不要超過50ul,直接進入下一步不合理波動。
2.加入250ul裂解液宣講手段,加入10μl RNase A(10mg/ml)溶液,振蕩混勻積極拓展新的領域,室溫放置5-10分鐘配套設備。
3.加入10μl蛋白酶K(10mg/ml)溶液,顛倒混勻相對開放,65℃放置10-30分鐘推進高水平,期間顛倒3-5次,小心內(nèi)心管蓋受熱開啟拓展應用。如30分鐘沉淀無法*消失生產創效,請注意第6步處理。
4管理,在上清中加入三倍體積無水乙醇優化上下,充分混勻。
5.12000rpm離心5分鐘模樣,吸去上清生產體系,核酸在沉淀中。
6.沉淀中加入500ul結(jié)合液提供了遵循,65℃水浴1-2分鐘,核酸沉淀可溶解(如無法*溶解大型,可轉(zhuǎn)移上清到一新的離心管中服務效率,棄沉淀)。
6.玻璃奶搖勻增持能力。加入50ul搖勻的玻璃奶共同努力,混勻,室溫放置2分鐘追求卓越,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘逐漸完善,去上清;沉淀加入1ml 70%乙醇合理需求,振蕩混勻是目前主流,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,去上清高質量,70%乙醇重復洗一次充分發揮,再用無水乙醇洗一次。去上清管理,再次離心2分鐘設計,用小吸頭吸去上清業務指導。
7.室溫放置10分鐘(如果玻璃奶加量,請適當延長放置時間就此掀開,此步為去除殘余酒精長足發展,以免影響下游實驗),加入50-100ul TE緩沖液混勻溶解穩步前行,65℃水浴5分鐘結構不合理。離心,取上清為所提基因組逐步顯現。
8.電泳或者其他方法檢測銘記囑托,進入下游實驗。
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)自動化裝置,是一家專業(yè)從事生化試劑示範、分子生物學試劑、實驗耗材及實驗儀器研發(fā)有很大提升空間、銷售運行好、服務為一體的生物科技公司,公司主要經(jīng)營的進口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas(MBI), NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等可能性更大;產(chǎn)品涉及化工原料部署安排、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑技術、細胞培養(yǎng)及檢測常用試劑生產能力、實驗室常用耗材及儀器。